詳述弱極性色譜柱的沖洗保存要點(diǎn)
詳述弱極性色譜柱的沖洗保存要點(diǎn) 對(duì)使用后對(duì)弱極性色譜柱,沖洗保存*,使用緩沖系統(tǒng)的尤其要注意。推薦反相色譜系統(tǒng)的通用沖洗流程:
將所有通道置換成含有較低有機(jī)相比例的水相中,比如10-30%乙腈或甲醇,然后沖洗1個(gè)小時(shí),然后再梯度增加有機(jī)相比例,各沖洗一定時(shí)間,終保留在高有機(jī)相比例的沖洗液里。低有機(jī)相比例的沖洗液是為了盡可能地沖洗緩沖鹽。通常低壓梯度洗脫的液相色譜儀采用的是四元泵,就是單泵四通道,比例閥混合。這種混合方式有個(gè)弊端,就是混合效果差,因?yàn)楦魍ǖ啦煌壤峭ㄟ^(guò)開(kāi)關(guān)各通道閥的時(shí)間來(lái)控制的。往往是兩通道混合,就算沒(méi)有用緩沖鹽,還是建議先按比例混合好了,然后走單通道,否則的話一樣會(huì)造成鹽析出,或者基線波動(dòng)。走梯度洗脫的話,往往會(huì)把有機(jī)相通道中加入一定比例的水,或者把水相通道配成梯度洗脫的初始比例,把有機(jī)相通道配成梯度洗脫終的比例。
這里有兩點(diǎn)需要說(shuō)明:
1.一般認(rèn)為,色譜系統(tǒng)包括弱極性色譜柱的沖洗甚至保存,都可以使用流動(dòng)相,只是不加緩沖鹽、酸堿等。有一些品牌色譜柱,建議如果不是含鹽或者強(qiáng)酸強(qiáng)堿,一般不建議沖洗。不過(guò)這只適合短期保存,也就是沒(méi)隔多久又要再次使用。長(zhǎng)期不用的色譜系統(tǒng)包括色譜柱還是應(yīng)該沖洗后保存在高比例低極性溶劑體系中。一般建議正相系統(tǒng)保存在正已烷:異丙醇=90:10,反相系統(tǒng)保存在乙腈:水=90:10或者100%乙腈中。
2.隨著快速分離色譜柱的發(fā)展,很多的低粒徑色譜柱得到應(yīng)用,而且往往柱溫也較高,通常達(dá)到50度或以上,這種色譜系統(tǒng)通常柱壓也較高,貿(mào)然用高比例水相沖洗可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)超壓。可以先用流動(dòng)相沖洗,或者斷開(kāi)色譜柱,用高比例水相沖洗系統(tǒng),再接上柱子逐步提高有機(jī)相比例沖洗,也可以先調(diào)低流速?zèng)_洗。而且,待沖洗快要結(jié)束時(shí)再降低柱溫。